这个是best365官网体育投注从一位qPCR实验大神拿搞来的实验流程

，看着真是简朴详细

，品牌货号都标注好了

，准备做qPCR实验的小同伴可以参考以下。

实验来了~

一、RNA提取

1.6孔板用预冷PBS（Genesand SG103-1）洗2次

，每孔加入1mltrizol（Genesand RE703）

，摇床孵育10min

，然后移至1.5去酶EP管（LABSELECT MCT-001-150-S）内

，4°C

，12000G离心5min

2.直接加入200ul氯仿（买不到了 去医院借）

，强烈震荡15-20s

，室温孵育5min

3. 4°C

，12000G离心15min

，最上层水相300-400ul转移至新的1.5去酶EP管（LABSELECT MCT-001-150-S）中

，加入等体积异丙醇（麦克林 I811925-500ml）

，上下倒置混匀

，室温安排10min。

4. 4°C

，12000G离心10min

，丢上清

，加入1ml（与trizol等体积）75%乙醇（无水乙醇（麦克林E809056-500ml） ：DEPC（碧云天R0021） 水=3:1）洗2次

，上下倒置混匀

5. 4°C

，12000G离心5min

，扬弃上清

，室温下风干5min

，加入20ulDEPC（碧云天R0021）水。

二、RNA纯度和完整度判断

1.紫外分光光度法测定浓度和纯度

2.RNA条带完整度测定

三、反转录

PCR条件：42°C孵育40分钟

，85°C加热5分钟

，获得CDRNA

，冷冻生涯。

四、QPCR反应

四．上机